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張掖?最常見的幾種蛋白濃縮方法,我們必須掌握!

發(fā)表時間:2024-06-22 訪問量:13035

1,透析袋濃縮法

利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋(無透析袋可用玻璃紙代替),結扎,把高分子(6000-12000)聚合物如聚乙二醇(碳蠟)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸水劑配成30%-40%濃度的溶液,將裝有蛋白液的透析袋放入即可。吸水劑用過后,可放入溫箱中烘干或自然干燥后,仍可再用。張掖濃縮蛋白設備

主要用于更換蛋白質的緩沖液,有透析袋即可,不需要特殊的儀器。

2,冷凍干燥濃縮法

這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法,它既使蛋白質不易變性,又保持蛋白質中固有的成分。它是在冰凍狀態(tài)下直接升華去除水分。具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍,然后移置干燥器內(干燥器內裝有干燥劑,如NaOH、CaCl2和硅膠等)。密閉,迅速抽空,并維持在抽空狀態(tài)。數(shù)小時后即可獲得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白質保存方便,應用時可配成任意濃度使用。也可采用凍干機進行冷凍干燥。

在冷凍狀態(tài)下讓揚品種的液體升華。

3,吹干濃縮法

將蛋白溶液裝入透析袋內,放在電風扇下吹。此法簡單,但速度慢,且溫度不能過高,更好不要超過15℃。

4,超濾膜濃縮法

此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出,而蛋白質存留于膜上達到濃縮目的。有兩種方法進行濃縮:一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內,在不斷攪拌之下過濾;另一種是將蛋白液裝入透析袋內置于真空干燥器的通風口上,負壓抽氣,而使袋內液體滲出。

主要針對小體積蛋白質溶液(幾ml)此法更不易引起變性,不過得有濃縮器,不是哪個實驗室都有的。

5,凝膠濃縮法

選用孔徑較小的凝膠,如SephadexG25或G50,將凝膠直接加入蛋白溶液中。根據(jù)干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數(shù)而稱取所需的干膠量。放入冰箱內,凝膠粒子吸水后,通過離心除去。

6,濃縮膠濃縮法

濃縮膠是一種高分子網(wǎng)狀結構的有機聚合物,具有很強的吸水性能。每克干膠可吸水120ml~150ml。它能吸收低分子量的物質,如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等,適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質。濃縮后,蛋白質的回收率可達80%~90%。比凝膠應用方便,直接加入被濃縮的溶液中即可。必須注意,濃縮溶液的pH值應大于被濃縮物質的等電點,否則在濃縮膠表面產(chǎn)生陽離子交換,影響濃縮物質的回收率。

7,丙酮沉淀法:

試驗要求的儀器簡單,但是常常導致蛋白質變性。

8,免疫沉淀法:

通過免疫沉淀法,用蛋白質特異性能夠定量能夠分離目的蛋白。有三個步驟組成:首先將特異性抗體加入細胞提取物,第二步加入經(jīng)化學固定的金黃色葡萄球菌,以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質A和抗體形成復合物,蛋白質A與免疫球蛋白的Fc部分有高度的親和性?;蛘哒f,純化的蛋白A結合Sephrarose樹脂,為從細胞提取物中分離出抗原抗體復合物,提供一個固體基質。最后通過洗脫,除去尚未沉淀的雜質。

為了除去已破碎的或固定差的細胞,在用于免疫沉淀(作用)之前可以與纖細地金黃色葡萄球菌細胞,如果要用蛋白質ASephrarose樹脂,參考廠家說明書。

9,硫酸銨沉淀法:

利用高濃度鹽將蛋白質析出(鹽析),選擇硫酸按是因為:鹽析有效性,pH范圍廣,溶解度高,溶液散熱少,經(jīng)濟。

10,(低溫)有機溶劑沉淀法:

強調低溫(0-4度以下)是因為10度時蛋白會在有機溶劑中變性,可用乙醇,丙酮等。注意:Mg2++離子,pH值。

11,聚乙二醇(PEG)沉淀法:

PEG是一個水溶性非離子多聚體,使用PEG時旨在個別情況下才會是蛋白質稍有變性!他溶解是散熱低,形成沉淀的平衡時間短,通常達到30%時蛋白質就會達到更大量的沉淀。


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